Parzûnek floransansê di mîkroskopa floransê de hêmanek bingehîn e. Pergalek tîpîk sê fîlterên bingehîn hene: Parzûnek heyecanê, Parzûnek belavbûnê û neynek dîkroîk. Ew bi gelemperî di kubekê de têne pak kirin da ku kom bi hev re têxin mîkroskopê.
Parzûnek fluorescence çawa dixebite?
Parzûna heyecanê
Parzûnên heyecanê ronahiya pêlekek taybetî vediguhezînin û dirêjiyên pêlên din asteng dikin. Ew dikarin ji bo hilberandina rengên cihêreng bi guheztina parzûnê ve werin bikar anîn da ku tenê yek reng derbas bibe. Parzûnên heyecanê di du celebên sereke de têne - Parzûnên derbasbûna dirêj û fîlterên derbasbûna bandê. Exciter bi gelemperî parzûnek bandpassê ye ku tenê dirêjahiya pêlên ku ji hêla fluorophore ve têne veguheztin derbas dibe, bi vî rengî heyecana çavkaniyên din ên floransê kêm dike û ronahiya heyecanê di bendika belavkirina floransê de asteng dike. Wekî ku ji hêla xêza şîn a di jimarê de tê xuyang kirin, BP 460-495 e, ku tê vê wateyê ku ew tenê dikare di fluorescence 460-495nm re derbas bibe.
Ew di nav riya ronahiyê ya mîkroskopa floransê de tê danîn û hemî dirêjahiya pêlên çavkaniya ronahiyê ji xeynî rêza heyecana fluorophore fîlter dike. Veguheztina herî kêm a parzûnê ronî û ronahiya wêneyan destnîşan dike. Ji bo her parzûna heyecanê herî kêm %40 veguheztinê tê pêşniyar kirin ku veguheztin bi îdeal> 85%. Berfirehiya parzûna heyecanê divê bi tevahî di nav rêza heyecana fluorophore de be bi vî rengî ku dirêjahiya pêla navendê (CWL) ya parzûnê bi qasî ku gengaz nêzî dirêjahiya pêla heyecana lûtkeyê ya fluorophore be. Tîrêjiya optîkî ya parzûna heyecanê (OD) tarîtiya wêneya paşîn destnîşan dike; OD pîvanek e ku çiqas fîlterek dirêjahiya pêlên li derveyî rêza ragihandinê an firehiya bandê asteng dike. Kêmtirîn OD 3.0 tê pêşniyar kirin lê OD 6.0 an mezintir îdeal e.
Parzûna Emission
Parzûnên belavkirinê ji vê armancê re xizmet dikin ku rê bidin floresensa xwestî ya ji nimûneyê ku bigihîje dedektorê. Ew dirêjahiya pêlên kurt asteng dikin û ji bo dirêjahiya pêlên dirêj veguheztina bilind heye. Tîpa parzûnê jî bi jimarekê ve girêdayî ye, mînakî BA510IF di wêneyê de (fîltera astengiya destwerdanê), ew binavkirin bi dirêjahiya pêlê di %50ê veguhestina wê ya herî zêde de vedibêje.
Heman pêşniyarên ji bo fîlterên dilşewatiyê ji bo fîlterên belavbûnê rast in: veguheztina hindiktirîn, bandfireh, OD, û CWL. Parzûnek emelê ya bi CWL-ya îdeal, veguheztina hindiktirîn, û kombînasyona OD-ê wêneyên gengaz ên herî geş, bi astengkirina herî kûr a gengaz peyda dike, û tespîtkirina îşaretên emîsyonê yên herî qels piştrast dike.
Neynikê Dichroic
Neynika dîkroîk di navbera parzûna heyecanê û parzûna belavbûnê de bi goşeyek 45° ve tê danîn û dema ku sînyala emelê ber bi dedektorê ve dişîne, sînyala heyecanê ber bi fluorophore ve nîşan dide. Parzûnên dîkroîkî yên îdeal û dabeşkerên tîrêjê di navbera refleksa herî zêde û veguheztina herî zêde de veguheztinên tûj hene, bi refleksek> 95% ji bo firehiya parzûna heyecanê û veguheztinek ji%> 90 ji bo firehiya parzûna belavbûnê. Parzûna bi dirêjahiya pêla hevberdanê (λ) ya fluorophore di hişê xwe de hilbijêrin, da ku ronahiya felqê kêm bikin û rêjeya nîgar-bi-dengê ya wêneya floransentê herî zêde bikin.
Di vê jimarê de neynika dîkroîk DM505 e, ji ber ku 505 nanometre dirêjahiya pêlê ye di %50 ya herî zêde veguheztina vê neynikê de. Kevirê veguheztinê ji bo vê neynikê veguheztina bilind li jor 505 nm, daketinek hişk a veguheztinê li çepê 505 nanometre, û refleksa herî zêde li çepê 505 nanometre nîşan dide lê dîsa jî dibe ku hin veguheztin li jêr 505 nm hebe.
Cûdahiya di navbera parzûnên derbasbûna dirêj û bandê de çi ye?
Parzûnên floransê dikarin li du celeban bêne dabeş kirin: derbasbûna dirêj (LP) û derbasbûna bendê (BP).
Parzûnên derbasbûna dirêj dirêjahiya pêlên dirêj vediguhezînin û yên kurttir asteng dikin. Dirêjahiya pêlê ya qutkirî nirxa 50% ji veguheztina lûtkeyê ye, û hemî dirêjahiya pêlên li jorê qutkirî ji hêla parzûnên derbasbûna dirêj ve têne şandin. Ew bi gelemperî di neynikên dichroic û parzûnên belavbûnê de têne bikar anîn. Parzûnên Longpass divê werin bikar anîn dema ku serîlêdan hewceyê berhevkirina emîsyonê ya herî zêde hewce dike û dema ku cûdahiya spektral ne xwestek an jî hewce ye, ku bi gelemperî ji bo sondajên ku di nimûneyên ku bi astên otofluoressence yên paşerojê yên nisbeten nizm ve cûreyek yek emelê çêdikin re wiha ye.
Parzûnên derbasbûna bandê tenê bandek dirêjahiya pêlê vediguhezînin, û yên din asteng dikin. Ew guheztinê kêm dikin bi rê didin ku tenê beşa herî bihêz a spektruma belavkirina fluorophore were veguheztin, dengê autofluorescence kêm bikin û bi vî rengî rêjeya sînyala-dengê di nimûneyên otofluorescence paşperdeya bilind de, yên ku fîlterên derbasbûna dirêj nikaribin pêşkêş bikin, baştir bikin.
Çend cureyên fîlterên floransê BestScope dikare peyda bike?
Hin cûreyên hevpar ên parzûnan parzûnên şîn, kesk û ultraviolet hene. Wekî ku di tabloyê de tê nîşandan.
| Parzûna Set | Parzûna heyecanê | Neynikê Dichroic | Parzûna Astengiyê | Dirêjahiya pêlê çira LED | Bikaranînî |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | ·FITC: Rêbaza antîbody fluorescent ·Pirteqala asîdî: ADN, ARN ·Auramin: Bacillusê zirav · EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | ·Rhodamine, TRITC: Rêbaza antîbody fluorescent ·Propidium iodide: ADN ·RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | · Çavdêriya auto-fluorescence ·DAPI: Reqandina DNA ·Hoechest 332528, 33342: ji bo rengkirina kromozomê tê bikaranîn |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | ·Katecholamines · 5-hîdroksî trîptamîn ·Tetracycline: Skeleton, Diran |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | ·Cy5 ·Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Komên parzûnê yên ku di destkeftiyên floransê de têne bikar anîn li dora dirêjahiya pêlên sereke yên ku di sepanên floransê de têne bikar anîn, ku li dora fluorophoresên herî têne bikar anîn têne sêwirandin. Ji ber vê yekê, ew bi navê fluorophore ku ew ji bo wênekêşiyê têne armanc kirin jî têne nav kirin, wek kubên parzûnê DAPI (şîn), FITC (kesk) an TRITC (sor).
| Parzûna Set | Parzûna heyecanê | Neynikê Dichroic | Parzûna Astengiyê | Dirêjahiya pêlê çira LED |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
| Texas Red | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
Meriv çawa parzûnek floransê hildibijêre?
1. Prensîba hilbijartina parzûna floransê ev e ku meriv bihêle ku ronahiya floransê/weşanê heya ku gengaz be di dawiya wênegiriyê re derbas bibe, û di heman demê de ronahiya heyecanê bi tevahî bloke bike, da ku rêjeya herî bilind a sînyala-dengê bi dest bixe. Bi taybetî ji bo serîlêdana heyecana multiphoton û mîkroskopa refleksa navxweyî ya tevayî, dengê qels dê di heman demê de bibe sedema destwerdana mezin ji bandora wênekêşiyê re, ji ber vê yekê hewcedariya rêjeya nîşana berbi deng bilindtir e.
2. Bi heyecan û emeliyatê ya fluorophore dizanin. Ji bo avakirina komek parzûnek fluorescence ku wêneyek bi kalîte, berevajî bilind bi paşxaneyek reş çêdike, fîlterên heyecan û belavbûnê divê bi rêjeyek derbasbûna hindiktirîn li ser deverên ku bi lûtkeya heyecana fluorophore an veguheztinê re têkildar in, veguheztina bilind bi dest bixin.
3. Berdewamiya parzûnên floransê bihesibînin. Pêdivî ye ku ev parzûn ji çavkaniyên ronahiyê yên tund ên ku ronahiya ultraviyole (UV) çêdikin, ku dikare bibe sedema "şewitandinê" çêdike, nemaze ji parzûna dilşewat re ji ber ku ew di bin hêza tevahî ya çavkaniya ronahiyê de ye.
Wêneyên Nimûneyên Cûda yên Fluorescent
Çavkanî li ser Înternetê têne berhev kirin û organîze kirin, û tenê ji bo fêrbûn û ragihandinê têne bikar anîn. Ger binpêkirinek hebe, ji kerema xwe bi me re têkilî daynin da ku jêbirin.
Dema şandinê: Kanûn-09-2022